用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后,要加入 EDTA-SDS中止液使限制性内切核酸酶失活,这样有利于重组连接。
Ⅱ型限制性内切核酸酶:()。
第一个分离的限制性内切核酸酶是();而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是()。
限制性内切核酸酶 Acy I识别的序列是 5’—GRCGYG-3’,其中R(),Y()。
如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA分子的末端,那么接近末端的程度也影响切割,如 HpaⅡ和 MboI要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。
严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是()的酶。基因工程中把那些具有识别()的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。
限制性内切核酸酶 EcoRI 在野生型的丸噬菌体 DNA 中有 5 个切点、Hind Ⅲ有 7 个切点,BamH I也有 5 个切点。调整这些酶切位点的数量,主要通过()。
能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌,其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。
限制性内切核酸酶在 DNA中的识别/切割位点的二级/三级结构也影响酶切效率。一般来说,完全切割质粒或病毒 DNA,要比切割线状 DNA需要更多的酶,最高的需要 20倍。
基因工程中使用的Ⅱ类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性,而且有甲基化酶的活性。