简述海带无性繁殖系育苗（配子体克隆育苗）

正确答案： （1）克隆的扩增培养
①培养设施配备制冷系统、紫外线空气消毒系统的隔热保温室。室内设培养架，以日光灯为光源。采用风量48m3/h漩涡式充气机充气，用18.9L塑料瓶作培养容器。
②培养方法将种质库低温保存的克隆簇状体经高速组织捣碎机切割成200~400μm细胞段，接种于有效培养水体为16L白色塑料瓶。初始接种密度：按克隆鲜重1~1.5/L。24h连续充气，使配子体克隆呈悬浮状态。经四十天培养，由初始200~400μm细胞段长成簇状团，对于克隆团内部细胞，光照已严重不足，需及时进行机械切割并分瓶扩种。
③培养条件温度10~20℃，以日光灯为光源，24h连续光照。接种初期：1500~2000lx，随密度增大，光强：2000~3000lx；营养盐：NaNO3-N10g/m3，KH2PO4-P1g/m3。每周更换一次培养液，更换前停止充气，使克隆自然沉降于培养容器底部，沉降彻底倒出上清液，沉降不彻底或克隆量较多，可用300目筛绢收集倒出克隆体。
（2）采苗
克隆采苗具体流程可分为：
①一次分离将扩增培养的克隆簇状体按雌雄鲜重比2：1混合，连同少量培养液置于高速组织捣碎机进行第一次切割，切割时间：10~15s，将克隆由簇状团切割成500~600μm的细胞段。
②短光照培养将一次分离的配子体克隆进行短光照培养，使雌雄配子体由生长状态转向发育状态，附苗后发育成孢子体。短光照培养光期L：D为10：14，光强1500lx左右，温度为10~12℃，营养盐NaNO3-N10g/m3，KH2PO4-P1g/m3。短光照培养在采苗前7~16天进行。
③二次分离经7~16天短光照培养，配子体细胞仍有所生长，采苗前要第二次机械切割，并经400目筛绢搓洗过滤。滤出的细胞段为1~5个细胞。
④附苗滤出的细胞液经低温（5~6℃）海水稀释一定浓度，用喷雾器喷洒在棕绳苗帘且加满低温海水的培育水面上。每个棕绳苗帘按雌克隆鲜重3克进行喷洒。
（3）幼苗培育
①水温控制采苗时5~6℃，静水期间不超过15℃，流水期间水温7~10℃。
②光照控制配子体至8列细胞时，高光3000lx，平均光1700~1800lx；8列细胞至0.3mm时，高光3300lx，平均光1800~1900lx；0.3~3mm，高光3600lx，平均光1900~2000lx；3~5mm，高光4000lx，平均光2100~2200lx；5~10mm，高光4500lx，平均光2200~2400lx；10mm以上，高光5000lx以上。
③营养盐的供给0.5mm前：NaNO3-N3g/m3，KH2PO4-P0.3g/m3；FeC6H5O7-Fe0.02g/m3；0.5mm后：NaNO3-N4g/m3，KH2PO4-P0.4g/m3。
④水流调节采苗第一天，静水培养，24h后微流水。
⑤苗帘的洗刷孢子体大小在8列细胞时开始洗刷，洗刷力度前期弱，后渐增强。如果附苗密度偏大，孢子体大小在2~4列细胞时就开始洗刷，将冲刷下来的孢子体和配子体进行收集，重新附着在空白苗帘上，进行双层帘培育，使配子体菜苗双层帘的使用成为可能，不至造成克隆浪费。
⑥清池采苗二十天后开始，前期每十五天清池一次，后期7~10天一次。

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