在进行鱼类人工雌核发育诱导时，有哪些必须的步骤？各有哪些方法及特点？

正确答案： 根据天然雌核发育鱼类的细胞学原理，进行人工雌核发育的诱导有两个关键技术：
第一个是精子遗传物质失活。具体方法有：
一.物理处理
γ射线与x射线：
原理：它们主要诱发染色体断裂；
优势：二者具较好的穿透力，便于大量处理精子；
缺陷：但经x、γ射线处理的精子生存力和受精能力都较差，在雌核发育；
二.化学方法：
1.常用药品有：甲苯胺兰、乙烯脲、二甲基硫酸盐
2.应用效果：化学药物的处理效果不及辐射，在鱼类的雌核发育诱导中使用较少；但在无脊椎动物如贝类、虾蟹中曾有应用。
第二个是卵子染色体加倍。具体方法有：温度休克和静水压及化学处理
一.温度休克就是用高于（热休克）或低于（冷休克）卵子的最适发育温度的方法处理卵子的技术；
温度休克的作用机制：主要是引起细胞内酶构型的变化，阻碍酶促反应而使细胞分裂时形成纺锤丝所需的ATP供应途径受阻，破坏微管的形成，使由微管蛋白聚合成的微管解体或阻止微管的聚合和染色体移动，从而抑制极体外排或细胞分裂；
二.静水压的作用机制：破坏纺锤丝的微管亚单位而抑制极体外排或抑制有丝分裂；当施加压力时，有丝分裂器中的纺锤丝崩解，由蛋白质组成的微管解凝，纺锤体及星光随之消失，分裂受到抑制；
当撤消压力后微管蛋白质重新聚集，纺锤丝接着形成，星光及纺锤体重新再现，分裂随之启动
静水压的特点是：
1.静水压一次处理的卵子数量少，对胚胎的损伤大，孵化率低，胚胎畸形率高；
2.水压机的质量也参差不齐，严重影响诱导效果；
3.但其易产生纯合个体，利于培育纯系，在科研中备受青睐；
三.化学处理：1.原理：利用能够抑制细胞分裂的化学物质来干预细胞分裂过程
2.常用药物：秋水仙素（Colchicine）、细胞松弛素-B（CB）、咖啡因（caffeine）等
四.生物杂交：一般采用远缘杂交方法可以获得雌核发育二倍体。

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